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Na fase quatro, reverteremos nossas iniciais de ligação cruzada de proteínas de DNA, seguido de
purificação do DNA. Comece por tomar cada amostra de IP, bem como a amostra de entrada, que
não seguir os passos anteriores IP e adicionar 8 microlitros de 5 de sódio molar
cloreto para as 200 amostras de microlitros seguido por agitação em vórtex.
Incubar a 95 graus Celsius durante 15 minutos. Para purificar cada amostra, vamos utilizar um DNA colunas de sílica de ligação de acordo
com as instruções do fabricante. Primeiro adicione cada amostra para as quantidades apropriadas
de tampão de ligação de ADN em vórtice, em seguida, transferir cada amostra a uma coluna de colocado dentro de um
tubo de coleta. Centrifugar as colunas a 15.000 g durante 1 minuto.
Descartar o fluxo através do tubo de recolha e adicionar tampão de lavagem de ADN para cada coluna.
Centrifugar as colunas em 15000g durante um minuto. Descartar o fluxo através do tubo de recolha
e girar as colunas vazias em 15000g por dois minutos para garantir a certeza de que eles estão completamente secos.
Descartar o tubo de recolha de idade e colocar a coluna de purificação para um tubo novo e limpo.
Adicionar 50 microlitros de tampão elusion ADN directamente para a membrana da coluna.
Deixe descansar por um minuto, em seguida realizar uma centrifugação final à 15000g por 1 minuto.
Descarte a coluna de purificação e guardar o ADN purificado a -20 graus Celsius até estar pronto para a última fase.