Tip:
Highlight text to annotate it
X
No dia dois de nosso procedimento ICC vamos adicionar o nosso anticorpo secundário, execute
uma rotulagem dupla opcional e passo marcação nuclear,
montar nossos lamínulas de slides, e obter imagens de nossos anticorpos com
um microscópio fluorescente.
Primeiro
nós aspirar seguinte solução primária anticorpos por lavagem das células
três vezes com PBST, durante cinco minutos cada.
Em seguida preparar o anticorpo conjugado floraform secundário que irá ligar-se a
o anticorpo primário.
Diluir o tampão de bloqueio secundário
na diluição recomendação especificado na folha de dados
e incubar à temperatura ambiente durante uma hora.
Cobrindo as placas com película impede corantes sensíveis de degradante.
Aspirar a solução de anticorpo secundário seguido de lavagem das células
três vezes com PBST
durante cinco minutos cada.
Como etapa opcional um par separado primário e secundário pode ser usado
para visualizar um segundo epítopo, utilizando um andar diferente para ele.
Além disso, os corantes de ligação ao ADN, tais como DAPI pode ser aplicada sem a necessidade de
anticorpos secundários.
Consulte o Protocolo de Novus escrito completo para obter instruções sobre como dobrar e
etiqueta triplo.
Lamelas agora está pronto para ser montado em lâminas de microscópio.
Dê uma lâmina limpa e dispensar uma gota de meio de montagem Antifade por lentamente
marcação para baixo o êmbolo da pipeta.
Remova cuidadosamente uma lamela do poço,
permitir a lavagem em excesso escorrer
e colocar as células face para baixo para o slide.
Polonês unha clara pode ser usada para vedar a lamela e evitar que ele
secar.
As lâminas podem agora ser visualizados sob um microscópio ou armazenado a -20
ou 4 graus Celsius em uma caixa de lâminas escuras ou livro de slides.
Limitar a quantidade de tempo que cada slide é exposta à luz do microscópio auxiliarão
no prolongamento do sinal fluorescente
e impedir o branqueamento foto.