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Bem-vindo à Série Novus Protocolo Visual.
Neste vídeo você vai aprender como realizar todas as fases da fluorescente
imunocitoquímica, utilizando os métodos mais comuns para este ensaio.
Antes de iniciar o procedimento de ICC,
vamos demonstrar como preparar lamínulas e placas de cultura de células
seguido pelo revestimento de nossas células.
Começamos o tratamento ácido lamínulas novos em um molar de ácido clorídrico para
24 horas.
Depois de cuidadosamente decantação do ácido e remover as lamelas de vidro,
lavamos cada um com água destilada,
em seguida, uma lavagem final com etanol.
Como um passo opcional que você pode colocar as lamelas em um rack de submergir subbing
em 0,1 mg / ml de solução de gelatina ou polilisina
durante cinco minutos.
Estes revestimentos auxiliar no fornecimento de aderência adicional de células para o
lamelas assegurar que eles não são separadas durante os passos de lavagem posteriores.
Após o tratamento, remover a cremalheira subbing e secar as lamelas na cultura
capuz ou num forno aquecido.
Limpas lamelas secas são então inseridos em cada poço de uma cultura de seis bem
prato
e coberto com uma tampa.
Para poupar tempo, grandes quantidades de placas podem ser preparadas com antecedência para uso posterior.
As placas podem também ser esterilizados por colocação sob luz UV da capa.
Com lamínulas limpas preparados em seis placas assim, podemos agora acrescentar nossas células.
Tecendo aqui em células de adicionar uma densidade de um meio milhão de células por cavidade.
As células são então cultivadas durante a noite na incubadora ou até que atinjam a sua preferida
densidade.